外泌體的多樣本自動分離與純化，現(xiàn)在它真的來了！??！
外泌體（exosomes）是一種由細胞分泌的、粒徑分布在30-200 nm之間的細胞外囊泡，其表面與內部攜帶大量蛋白質、脂質、核酸等生物分子。作為細胞間物質與信號通訊的重要媒介，外泌體在免疫應答、病毒感染、腫瘤、神經退行性疾病、心血管疾病等生命活動中起著重要的作用。由于外泌體攜帶的生物分子可直接反映來源細胞的生理與病理狀態(tài)，對這些生物分子的測定可使研究者更深入地了解體內的生理或病理情況，并有望作為腫瘤或其他疾病的診斷標志物。
雖然外泌體的檢測存在上述優(yōu)勢，但目前的外泌體提取方法仍為實驗人員手工操作，由于外泌體提取的效果直接與實驗人員的操作技術相關，導致提取的重復性與穩(wěn)定性存在一定欠缺。且現(xiàn)有方法大多存在步驟繁瑣耗時長、人員上手難度大等劣勢。如何準確高效地提取外泌體，使外泌體的制備流程標準化、穩(wěn)定化，一直是研究者們關注的熱點。
現(xiàn)在，外泌體的多樣本自動分離與純化，它終于來了！由上海邁景納米科技有限公司自主研發(fā)的MagExo?外泌體提取試劑盒，通過優(yōu)化的試劑體系與磁珠載體，可同基于磁珠的核酸自動化提取一樣，實現(xiàn)穩(wěn)定、標準化外泌體的多樣本自動分離與純化。從已有的核酸自動化提取可見，自動化的樣本處理不僅能降低實驗人員的勞動強度，還可減少提取過程中的人為實驗誤差、提高處理效率與通量，高通量的儀器大幅節(jié)省了時間成本與人力成本，增加了實驗的重復性與數(shù)據(jù)的可靠性?，F(xiàn)在，在外泌體的提取上這些也都可以實現(xiàn)，以下是MagExo?外泌體提取試劑盒的簡要提取流程：
圖2 MagExo?外泌體提取試劑盒的提取流程示意圖
外泌體在反應液中通過磁珠的表面基團以及磁珠與其他雜質的相對作用力被捕獲后，再通過洗脫液從磁珠表面被釋放，該流程與磁珠提取核酸的流程基本一致，可方便地嫁接到市售核酸提取儀中，通過簡單的程序修改，實現(xiàn)外泌體的自動化提取。
圖3 磁珠法核酸提取示意圖
以下是基于市面常見的32通量半自動核酸提取儀設計的外泌體自動化提取方案，僅供參考，具體可根據(jù)實驗自行設計。（全自動核酸提取儀更佳，儀器包括移液部分，只需放入試劑樣本即可）
圖4 深孔板板位內試劑與樣本示意圖
依上圖，在96孔深孔板中依次加入試劑和樣本。上機前，設置好程序，包括孵育與洗脫。第一遍洗脫完畢后，使用排槍將2/8列Elution Buffer移至3/9列，設置新的程序進行二次純化（單塊深孔板最多可做三次純化）。目前市售的核酸提取儀溫控都是加熱處理系統(tǒng)，我們在這里可考慮冰袋或冰塊對提取過程做溫控處理，使整個提取在低溫條件下進行。
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參考文獻：
[1] S. Wang, A. Khan, R. Huang, et al., Biosens. Bioelectron. 2020, 154, 112056.
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